HPLC法同時測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸含量

　　溶液的製備 對照品儲備液：精確稱取1.98mg蘆薈大黃素與2.02mg大黃酸對照品，分別置於2mL量瓶中，向其中加入甲醇定容至刻度，搖勻即對照品儲備液。對照品工作液：量取0.2mL蘆薈大黃素對照品儲備液，0.5mL大黃酸對照品儲備液，將其置於10mL量瓶中，充分混合。供試品溶液製備：精確稱取0.5g大黃粉末，將其放置於25mL量瓶中，向其中加入24mL甲醇，經30min超聲提取，加入甲醇定刻度，搖勻，濾膜濾過，待測。線性關係考察：分別取1μL，5μL，10μL，15μL，20μL，25μL對照品溶液進樣處理，峰麵積積分。結果顯示，蘆薈大黃素回歸方程為：Y=2.75×106X-3.53×104，r=0.9999，線性範圍為0.0198-0.495;大黃酸回歸方程為：Y=4.34×106X-1.31×105，r=0.9999，線性範圍為0.0505-1.2625。精密度試驗：精密量取10μL供試品溶液連續進行6次進樣，對蘆薈大黃素與大黃酸峰麵積積分值進行計算，RSD分別為3.32%、0.66%，即表明儀器具有良好的精密度。穩定性試驗：精密量取10μL供試品溶液，分別在製備後的0h，3h，6h，9h，12h，24h對其進行測定，並計算蘆薈大黃素與大黃酸峰麵積積分值，RSD分別為3.61%、1.48%，即表明在24h內供試品溶液穩定性良好。重複性試驗：精密稱取0.5g大黃粉末，根據“供試品溶液製備”方法完成6份溶液的製備，並進樣分析，計算蘆薈大黃素與大黃酸質量分數，RSD分別為4.05%、3.81%，即表明該方法具有良好地重複性。

　　回收率試驗：精密稱取6份0.1g大黃粉末，將其放置於10mL量瓶中，分別向其中精密添加相應體積的蘆薈大黃素與大黃酸對照品儲備液，向其中加入甲醇，使其能夠定容至9.5mL，根據“供試品溶液製備”方法製備20mL供試品溶液，測定加樣回收率以及RSD。結果顯示，蘆薈大黃素平均回收率為96.08%，RSD為1.79%，大黃酸平均回收率為96.08%，RSD為2.36%。樣品測定：根據上述方法，對3個不同批次的大黃樣品的蘆薈大黃素與大黃酸含量進行測定，見表1。

　　表1 3個批次的大黃樣品的蘆薈大黃素與大黃酸含量測定結果(mg.g-1)

　　樣品編號 蘆薈大黃素 大黃酸

　　1 0.565 0.445

　　2 0.393 0.772

　　3 2.921 4.262

　　提取方法：將蘆薈大黃素與大黃酸提取率作為指標，對乙醇、甲醇兩種溶劑進行考察，結果發現，甲醇的提取效果更佳;對甲醇回流以及甲醇超聲兩種處理方法進行了考察，結果顯示，兩種提取無明顯差異;分別進行了30min、45min與60min甲醇超聲提取，結果顯示無差異。供試品溶液製備方法 在供試品溶液製備中，通過精密稱取0.5g樣品，並將其定容至25mL，但根據回收率試驗，應當稱取0.25g樣品，並加入含量相等的對照品溶液最終定容至25mL，由於對照品的購買成本較高，故將其減少至0.1g，並將定容調整為10mL，兩者實際上並無明顯差異。綜上所述，運用HPLC法同時測定蘆薈大黃素與大黃酸含量，不僅具有較高準確度、精密度，且穩定性較好，各方麵均與要求相符合 。

　　馬青青 河南省疾病預防控製中心

　　許文清 鐵道警察學院